10 julio 2009

Por qué tanto miedo al bromuro de etidio?

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El bromuro de etidio (BrEt) es un agente químico muy usado en técnicas de biología molecular para teñir nuestros geles de agarosa y poder apreciar nuestras bandas de ADN; ya sean de los productos de extracción o de PCR. Existen dos formas de teñir los geles: i) remojando el gel de agarosa por 15 minutos en una bandeja con BrEt (0.5mg/L) después de haber hecho la electroforesis o ii) añadiendo el BrEt directamente al gel al momento de prepararlo. Con la primera evitamos contaminar nuestra cámara de electroforesis con BrEt y con la segunda evitamos exponernos a salpicaduras y otros accidentes que pueden ocurrir al hacer la tinción en bandeja.

Se han dado cuenta que desde que entramos a un laboratorio de biología molecular nos tienen traumados con el BrEt: "Cuidado que te salpique", "No lo huelas", "usa tres guantes", "no es por ese lado", "si te cae en la piel te va a dar cáncer y te puedes morir", entre otras cosas más.

Si bien se han hecho una serie de estudios in vitro acerca de los potenciales efectos del BrEt, encontrándose un potencial efecto carcinogénico, teratogénico, con capacidad de cambiar el marco de lectura de los genes, causando mutaciones genéticas y recombinaciones cromosómicas (asu¡ que miedo), no se ha provisto de evidencia suficiente que demuestre un efecto genotóxico en organismos más complejos que simples líneas celulares o tejidos embrionarios. Es más, hasta ahora no se ha demostrado un efecto carcinogénico en ningún animal.

Por muchos años el BrEt ha sido administrado al ganado para el tratamiento contra la enfermedad del sueño africana, a una dosis de 1mg/kg por vía subcutánea o intramuscular. Sin embargo, hasta ahora no se ha reportado algún tipo de complicación carcinogénica o tumoral en estos animales, así como tampoco defectos congénitos en las crías. Esto quiere decir que el BrEt es menos genotóxico de lo que presumían los estudios in vitro.

En biología molecular usamos concentraciones de 0.5mg/L, unas 2000 veces menor que del 50% de la dosis letal (LD50) que es más de 2g/Kg, tanto para absorción oral como cutánea. Para un investigador como yo, que pesa unos 60Kg aproximadamente, necesitaría tomar o lavarme las manos con unos 200,000L de la solución de tinción de BrEt para alcanzar el 50% de la dosis letal, lo cual es prácticamente imposible: son aproximadamente 50000 galones de BrEt para tinción, con esto podría llenar el tanque de combustible de 2000 automóviles.

Ya ven no hay que tenerle mucho miedo al BrEt, más miedo hay que tenerle al inocuo SYBR Green, un tinte para geles de electroforesis que se cree seguro. Se han hecho estudios que han demostrado una mayor genotoxicidad del SYBR sobre ratones que el propio BrEt.

Así que desde hoy... todos a brindar con Bromuro de Etidio.

Referencias:

National Toxicology Program. 
RRResearch. 
Gastó ATP escribiendo: David Castro a las 21:08
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19 comentarios:

  1. hay quimicos mas tóxicos que el EtBr como el fenol en los laboratorios, pero evidentemente es dificil asociar la exposición a un químico en pequeñas dosis con el desarrollo del cancer, para lo cual necesitarias al menos 3 mutaciones acumulativas a lo largo de los años.
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  2. Quisiera saber que medidas existen para minimizar o reducir el riesgo peligroso de este compuesto, si existe un protocolo; si existe algun otro compuesto o reactivo que me remmplaze y que sea menos peligroso que este.
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  3. Hola Julio, entre las principales medidas de seguridad es tener un ambiente especial para la tinción de los geles, que debe estar equipado con papel filtro, carbon activado y bolsas de bioseguridad. Nada debe salir de esta habitación. También usar guantes de nitrilo ya que los de latex no protejen. Depués de usar los geles dejarlos remojar en una bandeja con carbón activado, si es posible en presencia de luz ya que esta inactiva al BrEt. Finalmente filtrar e incinerar.

    El SYBR puede reemplazar al BrEt, o si tu laboratorio tiene plata, usar el Nanodrop para la cuantificación del ADN y la PCR en tiempo real para analizar los amplicones.

    Finalmente esperar unos 15 años para ver si sale un tumor por ahí y ver si nuestras medidas de seguridad funcionaron.
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  4. Todo esto me ha aclarado bastante el panorama. Sin embargo no hay que dejar de lado las medidas de seguridad.

    Sin embargo tengo una enorme duda: Si dentro de mi cuarto de tinción con Br-Et realizo varias tinciones con la misma solución, esta va perdiendo su capacidad de tinción y habrá que sustituirla por una nueva solución. Para nuestro caso, hemos almacenado esta viejas soluciones en un recipiente de metal completamente sellado. Pero este se va llenando poco a poco. ¿Qué es lo que tenemos que hacer con este líquido? ¿cómo lo podemos desactivar y desechar?
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  5. Hola Mercedes. Mira hay dos formas de hacerlo:

    Una vez lo neutralices usando el carbón activado, puedes eliminarlo directamente al caño, ya que las concentraciones que se usan son muy bajas (<10ug/ml), y esta se terminará por diluir en el drenaje, su concentración será más baja aún que no podrá causar daños.

    Si te sientes mal al hacer esto, puedes filtrar la solución neutralizada, reteniendo todo el carbon activado —que habrá capturado el BrEt— en un papel filtro. El volumen se reducirá considerablemente, podrás volver a usar el recipiente, y finalmente, cuando tengas muchos papeles filtros guardados le das a la empresa que maneja los residuos tóxicos de tu laboratorio, o si tienen un incinerador, lo llevas ahí. De todas maneras será incinerado.

    Saludos,
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  6. Hola, mi nombre es tony, nosotros agremas 0.3 microlitros de Bret al gel (30 mL) antes de solidificarse (y no le ponemos nada al buffer de corrida). ¿Que pasa si entro en contacto con el buffer luego de que corri el gel?? (es decir el gel con Bret estuvo durante toda la corrida de 20 min en contacto con el buffer y asumo que parte del Bret pasó al buffer, pero no sé cuanto).
    Además nosotros usamos guantes de látex, no protegen nada??? que hago??
    graciass
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  7. Claro, obvio que habrá difundido algo de BrEt en el buffer de corrida, sin embargo, la concentración presente en el gel es tan baja, que será casi imperceptible en el buffer.

    Por otro lado, como todo se hace usando guantes de latex o nitrilo, no hay riesgo de contaminación. Muchos creen que los guantes de latex no protegen nada, pero es absurdo: si llenas un guante de latex con aire o con agua veras que ni siquiera esas moléculas logran atravesarlo.

    Pero si tienes dudas y te salpicó algo del buffer en alguna parte descubirta del cuerpo, basta con un buen lavado con agua y jabón para eliminar cualquier rastro.

    Saludos.
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  8. Mira que es muy intersante lo escribes, porque tengo un profesor que le da tanta importancia como otros a este tema con el bromuro, y solo no dijo una vez que las consecuencias del contacto con él no se verian relmante en nosotros, literalmente dijo "por uds no se preocupen.. el problema quizá se refleje en sus hijos en sus cromosomas... si es que pasa algo". Bueno, pues tampoco quisiera que mis hijos heredaran algo malo jeje, pero bueno saber que no hay que tener tanto pavor a este químico (sobretodo yo que soy tan quisquillosa con los reactivos).. gracias por el aporte ;)
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  9. Hola! tengo una consulta.
    trabajo en un laboratorio y una companera descuidada dejo en el area de uso general un estuche con puntas desechables de micropipeta, supuestamente sin usar y sin rotular,el estuche o soporte estaba medio lleno (como con 60 puntas desechables de micropipetas); como siempre reutilizamos los estuches o soportes, yo lo puse en el autoclave y despues lo utilize sin guantes, ya que el proceso que estaba haciendo no necesitaba de guantes (estaba sacando volumenes muy pequenos de alcohol al 50%) posteriormente al terminar, se aparece la asesora de dicha pelaita y me dice que el estuche que yo estaba utilizando, la otra muchacha lo habia utilizado el dia anterior con el Bromuro de etidio...
    el estuche era el que estuvo en contacto con el bromuro de etidio, (supongo yo que cada vez que la otra muchacha agarraba el estuche con los guantes) las puntas desechables que quedaron dentro del estuche, fueron las que sobraron y no se utlizaron...

    existe riesgo de que me afecte el quimico??? aun cuando lo pase por el autoclave???? cuando las personas se volveran lo suficientemente profecional para poner todas esos instrumentos que estuvieron en contacto con material peligroso(estuche y puntas que sobraron del dia anterior - sin usar)en un lugar apropiado y le diran a sus demas companeros de laboratorio que no los toquen???
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  10. No te preocupes, lo más seguro es que la chica que uso el rack con los tips el día anterior, ni si quiera tocó los tips que quedaron en él. el bromuro o bien se pone en el gel al momento de prepararlo, lo cual requiere solo de un tip o bien se usa en una bandeja para remojar el gel en e´l, donde no se requiere ningun tip, así que no debes preocuparte, de todas maneras, en todo laboratorio de biologia molecular es recomendable usar guantes, no sólo para protegerte, sino también para no contaminar las muestras con tu propio ADN.

    Saludos.
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  11. Buen dia, oye me podrias dar las referencias a tu escrito para saber con que compruebas lo del bromuro de etidio?

    Saludos y gracias
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  12. Hola JC,

    Aquí la principal referencia que tomé sobre las dosis letales media, toxicidad, usos, etc:

    http://1.usa.gov/fArWE1

    y aquí una de mis fuentes:

    http://bit.ly/9OE05L

    Espero que te sirva.

    Saludos
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  13. HOLA
    tengo material contaminado (geles guantes, puntas y papel)con bromuro de etidio que estuvieron en contacto con un virus, al parecer no patogeno, quisiera saber si a ese material se le da un tratamiento de desactivacion o descontaminacion del bromuro de etidio y se desecha como residuo peligroso biologico infeccioso o no se le da ningun tratamiento y se desecha igual estuve investigando y lei que no se le da ningun tratamiento y se colocan en bolsas rojas es cierto esto??? o ¿¿como podria manejar ese tipo de desperdicio???
    ¿¿hay algun riesgo de que este en algun almacen temporal envuelto en papel y embolsado hasta que venga la compania encargada de recoger los residuos???
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  14. Hola,

    Mira, en el gel con BrEt o puntas usadas en la electroforesis el principal contacto que se tiene es con el ADN o ARN, dependiendo de lo que has usado. Ninguno de estas dos biomoléculas puede producir una enfermedad, así sean del virus más letal de todos. Las enfermedades virales se producen cuando el virus logra infectar a la célula hospedera, el material genético libre no lo puede hacer, y si lo hace sin ninguna protección es eliminado por las nucleasas y RNasas. Así que el peligro puede estar en los guantes con los que manipulaste al virus, ya que podrían haber partículas virales en él.

    Lo que se hace con ellos (con todo lo que estuvo en contacto con un agente potencialmente infeccioso) es ponerlo en las bolsas rojas que te mencionaron (OJO, no en cualquier bolsa roja, hay unas especiales de Biooseguridad) y se lleva al autoclave, luego se incineran. Si no hay un incinerador donde estás, después de autoclavar se desecha como residuo biológico.

    En cuanto a los geles y demás que han estado en contacto con el ADN o ARN del virus, no se le hace ningún tratamiento extra del que mencionamos anteriormente. En caso que te preocupe desechar el BrEt, simplemente lo capturas con el carbón activado, lo filtras y lo incineras. Aunque, como mencioné en el post, las concentraciones de BrEt usadas son tan bajas, no generará un daño al ambiente ni crecerán ratas mutantes en los desagües.

    Sin embargo, todo debe ser manejado con cuidado, eliminando los desechos en sus contenedores respectivos, ya que esas son las Buenas Prácticas de Laboratorio.

    Saludos.
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  15. Enhorabuena. Que algo no esté demostrado, por que no interese gastar dinero para decir que es cancerigeno, no demuestra nada.

    Brinda, brinda, a mi me la sopla. Pero no l cargues a la seguridad social.
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  16. Margarita LozadaNov 23, 2011 09:08 AM
    Hola David, tengo alguna experiencia en manejo de RPBI y difiero del comentario respecto a los guantes que estuvieron en contacto con el virus, partículas o fracciones de este y con bromuro de etidio; mira, con base en la norama oficial mexicana NOM-087 SSA-ECOL-2003, los guantes no son un RPBI, recordemos que aun cuando estuvieran empapados con sangre, el material del cual están hechos no permitiría que se quedara la sangre líquída, como tal, esta se seca y entre más seca menor probabilidad hay de que sobreviva cualquier microorganismo, ahora estos guantes ni siquiera tienen sangre. Lo que si comparto es la sugerencia de decontaminarlos con carbón activado y almacenarlos para que la empresa especializada en recolección de residuos peligrososse la lleve al sitio en el que le darán disposición final. Generalmente todos las facultades e institutos de investigación tienen un convenio con alguna de estas empresas.
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  17. Hola Margarita, gracias por tu comentario. Tienes razón, si hemos usado el mismo guante para extraer el ADN, sea cual sea la muestra de origen, y también para la corrida, si hay riesgo; pero si sólo lo has usado para la electroforesis no creo porque a lo mucho estará contaminado con ADN.

    Saludos :)
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  18. muy interesante lo que comentas, pero podrias poner algunas de tus referencias. por favor
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  19. @mennuz: Ya actualicé la entrada con las referencias, las cuales estaban dentro de uno de los comentarios que puse porque alguien más me lo había solicitado.

    Un saludo.
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